論文作者：龍佳奕，指導(dǎo)教師：丁選勝、許靜
所屬學(xué)院：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床藥學(xué)學(xué)院，二級(jí)學(xué)科：藥學(xué)（臨床藥學(xué)）
01 導(dǎo)師說
咖啡因是治療早產(chǎn)兒呼吸暫停的首選藥物，但早產(chǎn)兒咖啡因治療的臨床響應(yīng)存在個(gè)體差異。藥代動(dòng)力學(xué)及藥效學(xué)變異性是導(dǎo)致藥物治療響應(yīng)個(gè)體差異的重要原因。藥代動(dòng)力學(xué)方面，該研究通過LC-MS/MS法精確測(cè)定早產(chǎn)兒血漿中咖啡因及代謝物濃度；通過質(zhì)譜陣列法對(duì)咖啡因代謝酶相關(guān)基因多態(tài)性進(jìn)行分析；并將咖啡因臨床療效與咖啡因及其代謝物血藥濃度、性別、胎齡、體重、基因多態(tài)性等因素進(jìn)行相關(guān)性分析。藥效學(xué)方面，該研究通過檢測(cè)咖啡因作用靶點(diǎn)相關(guān)的基因多態(tài)性探究咖啡因藥效學(xué)相關(guān)因素對(duì)標(biāo)準(zhǔn)劑量咖啡因治療早產(chǎn)兒呼吸暫停個(gè)體差異的影響。研究為AOP治療方案的調(diào)整提供了重要的信息，并發(fā)掘了未來(lái)的研究方向，幫助優(yōu)化早產(chǎn)兒呼吸暫停咖啡因治療的策略，達(dá)到精準(zhǔn)藥物治療的目的。
早產(chǎn)兒呼吸暫停（AOP）是新生兒重癥監(jiān)護(hù)病房（NICU）最常見的疾病之一，嚴(yán)重威脅早產(chǎn)兒的健康，給患兒的家庭和社會(huì)造成巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和生活壓力，亟需得到更廣泛的關(guān)注和更有效的治療。咖啡因是治療AOP的首選藥物，已經(jīng)在臨床應(yīng)用了近50年，被稱為新生兒學(xué)最成功的故事之一。但其臨床實(shí)踐仍然面臨諸多問題，最為顯著的即是療效上的個(gè)體差異。因此，咖啡因相關(guān)的精準(zhǔn)藥學(xué)研究是值得我們臨床醫(yī)學(xué)、藥學(xué)的研究者們?nèi)ヌ接懙姆较颉１菊n題研究之初從藥物濃度檢測(cè)分析方法出發(fā)，使用超純水作為替代基質(zhì)，建立了完整的精確定量方法，并進(jìn)行臨床實(shí)踐中的治療藥物監(jiān)測(cè)服務(wù)。在此基礎(chǔ)上，收集臨床真實(shí)世界的病例數(shù)據(jù)，開展有效性、安全性以及體內(nèi)暴露差異的影響因素分析，研究結(jié)果為咖啡因在早產(chǎn)兒呼吸暫停患兒群體中的精準(zhǔn)用藥提供了重要的循證證據(jù)支持。
02 作者說
本研究通過TDM、藥物相關(guān)基因檢測(cè)等技術(shù)以及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析等手段，從咖啡因藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)兩方面探究了咖啡因治療AOP顯著個(gè)體差異的影響因素。
首先，本研究開發(fā)并驗(yàn)證了一種用于同時(shí)定量人血漿中的咖啡因及其主要代謝物副黃嘌呤、可可堿和茶堿水平的LC-MS/MS方法，不僅優(yōu)化了實(shí)驗(yàn)室之前具備的分析技術(shù)，并驗(yàn)證了使用大鼠血漿或超純作為替代基質(zhì)時(shí)與真實(shí)基質(zhì)的一致性，從而解決空白基質(zhì)難以獲得的問題。該方法成功應(yīng)用于在臨床中接受枸櫞酸咖啡因治療的AOP患兒血藥濃度的日常測(cè)定。
此外，對(duì)于納入本研究的中國(guó)早產(chǎn)兒，結(jié)果表明咖啡因的暴露水平或代謝酶相關(guān)的基因多態(tài)性并不是咖啡因治療響應(yīng)個(gè)體差異的主要影響因素，而咖啡因作用靶點(diǎn)（包括晝夜節(jié)律相關(guān)蛋白）的基因多態(tài)性似乎在咖啡因治療AOP響應(yīng)的個(gè)體差異中發(fā)揮了重要的作用。對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)劑量的咖啡因缺乏臨床響應(yīng)的早產(chǎn)兒，應(yīng)合理權(quán)衡藥物有效性與安全性，借助TDM進(jìn)行劑量方案的優(yōu)化，確定適合中國(guó)早產(chǎn)兒的劑量實(shí)施方案，同時(shí)探索與之相匹配的的咖啡因治療濃度范圍。此外，需要開展基礎(chǔ)研究來(lái)解釋咖啡因作用靶點(diǎn)（包括晝夜節(jié)律相關(guān)蛋白）的基因多態(tài)性以及AR、AHR和CLOCK信號(hào)通路如何在咖啡因治療AOP響應(yīng)中發(fā)揮作用，從而指導(dǎo)給藥方案的調(diào)整（如選擇恰當(dāng)?shù)慕o藥時(shí)間），進(jìn)一步優(yōu)化咖啡因的治療效果并減少不良反應(yīng)。未來(lái)也需要更大樣本量的研究，來(lái)確證并解釋咖啡因作用靶點(diǎn)（包括晝夜節(jié)律相關(guān)蛋白）的基因多態(tài)性在咖啡因治療AOP響應(yīng)中的作用。
03 碩士論文簡(jiǎn)介
本研究旨在從藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)兩方面，探究枸櫞酸咖啡因治療早產(chǎn)兒呼吸暫停（AOP）顯著個(gè)體差異的影響因素，為療效不佳患兒的劑量方案調(diào)整提供可供參考的臨床依據(jù)。研究選取一定時(shí)間內(nèi)南京醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院新生兒醫(yī)療中心（NICU）收治的胎齡小于35周、在出生后3天內(nèi)接受枸櫞酸咖啡因治療的早產(chǎn)兒作為研究對(duì)象，根據(jù)開始咖啡因治療后的響應(yīng)情況分為呼吸暫停組和無(wú)呼吸暫停組。接收用于治療藥物監(jiān)測(cè)而采集的血液樣本，一部分運(yùn)用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）法檢測(cè)血漿中的藥物濃度，剩余部分用于提取遺傳物質(zhì)后采用質(zhì)譜陣列法對(duì)目標(biāo)基因多態(tài)性進(jìn)行基因分型，結(jié)合患者的臨床資料分析咖啡因治療AOP顯著個(gè)體差異的影響因素。
本研究開發(fā)并驗(yàn)證了一種用于同時(shí)定量人血漿中的咖啡因及其主要代謝物的LC-MS/MS方法，并使用大鼠血漿或超純水作為替代基質(zhì)進(jìn)行了全面的方法學(xué)驗(yàn)證，解決空白基質(zhì)難以獲取的問題，方法成功應(yīng)用于AOP患兒的血藥濃度測(cè)定。基因檢測(cè)及資料分析結(jié)果表明，咖啡因的暴露水平或代謝酶相關(guān)的基因多態(tài)性并不是咖啡因治療響應(yīng)個(gè)體差異的主要影響因素，而咖啡因作用靶點(diǎn)（包括晝夜節(jié)律相關(guān)蛋白）的基因多態(tài)性似乎在咖啡因治療AOP響應(yīng)的個(gè)體差異中發(fā)揮了重要的作用。
學(xué)術(shù)成果
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[4]Guo HL#, Long JY#, Hu YH, Liu Y, He X, Li L, Xia Y, Ding XS, Chen F*, Xu J*, Cheng R*. Caffeine Therapy for Apnea of Prematurity: Role of the Circadian CLOCK Gene Polymorphism [J]. Front Pharmacol, 2021, 12: 724145.（并列一作）
[5]夏穎，龍佳奕，代浩然，沈夢(mèng)元，郭宏麗，胡雅慧，陳峰*．LC-MS/MS法測(cè)定人血漿中地高辛的濃度及其在兒童患者中的應(yīng)用[J]．中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2021，52(06)：719-724．
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