論文作者：李永旭，指導(dǎo)教師：盧娜
所屬學(xué)院：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床藥學(xué)學(xué)院，二級(jí)學(xué)科：藥理學(xué)
01 導(dǎo)師說(shuō)
該論文從膠質(zhì)瘤臨床治療中面臨的耐藥與復(fù)發(fā)問(wèn)題出發(fā)，尋找維持膠質(zhì)瘤干細(xì)胞特性的關(guān)鍵分子和信號(hào)通路，旨在為膠質(zhì)瘤治療提供新的思路。課題研究從TRAF4入手，發(fā)現(xiàn)TRAF4在膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中呈現(xiàn)高表達(dá)的狀態(tài)，在膠質(zhì)瘤原代細(xì)胞及細(xì)胞系中進(jìn)行的一系列表型研究均發(fā)現(xiàn)TRAF4可以維持膠質(zhì)瘤的干細(xì)胞特性、增強(qiáng)對(duì)替莫唑胺的耐藥性。在此基礎(chǔ)上，通過(guò)GST Pull-down實(shí)驗(yàn)、微量熱泳動(dòng)實(shí)驗(yàn)和免疫共沉淀等實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步確證了TRAF4通過(guò)與CAV1發(fā)生相互作用并穩(wěn)定CAV1的蛋白表達(dá)來(lái)維持膠質(zhì)瘤的干細(xì)胞特性及其對(duì)替莫唑胺耐藥性。課題進(jìn)一步明確了TRAF4通過(guò)泛素-蛋白酶體途徑來(lái)延長(zhǎng)CAV1蛋白的半衰期、增強(qiáng)其穩(wěn)定性。在對(duì)中樞藥物進(jìn)行篩選時(shí)，發(fā)現(xiàn)了利培酮能阻斷TRAF4的功能，從而抑制膠質(zhì)瘤的干細(xì)胞特性、增強(qiáng)化療敏感性，上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)開(kāi)發(fā)新的抗膠質(zhì)瘤藥物具有一定的借鑒意義。該博士論文選題依據(jù)充分，有一定創(chuàng)新性，研究?jī)?nèi)容豐富，層層深入推進(jìn)，圖表規(guī)范，結(jié)論嚴(yán)謹(jǐn)。
02 作者說(shuō)
1.求學(xué)回憶
轉(zhuǎn)眼間離開(kāi)中國(guó)藥科大學(xué)也有一段時(shí)間，在學(xué)校里度過(guò)充實(shí)的五年后，現(xiàn)如今回望，往事仍歷歷在目，難忘的是師恩，是同窗好友情。衷心感謝我的導(dǎo)師盧娜教授。我至今仍十分感激盧老師能給我攻讀研究生的機(jī)會(huì)。盧老師學(xué)識(shí)淵博，在繁重的科研教業(yè)之余，仍能在科研學(xué)習(xí)、為人處世和生活等方面給予我建議及幫助，鼓勵(lì)我成為更好的自己。這五年的讀研時(shí)光，有幸遇良師指導(dǎo)，諄諄教誨，銘記于心。此外，中國(guó)藥科大學(xué)也為我們提供了良好的科研環(huán)境與平臺(tái)，使我能夠順利的完成論文中的生化及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。在母校的幾年光陰在我生命中留下濃墨重彩的一筆，離開(kāi)母校之后，感恩之情仍溢于言表。
回想讀研過(guò)程，仍有很深的感觸，2017年我有幸以碩士的身份進(jìn)入盧老師的課題組，在良好的實(shí)驗(yàn)室氛圍和實(shí)驗(yàn)室老師及師兄師姐的嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目蒲凶黠L(fēng)的影響下，讓我從一無(wú)所知的菜鳥(niǎo)成為一名合格的博士畢業(yè)生，期間也經(jīng)歷過(guò)研究方向的轉(zhuǎn)變和其他的挫折，印象最深的就是培養(yǎng)腫瘤干細(xì)胞時(shí)總是會(huì)被細(xì)菌污染，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)進(jìn)度遲遲無(wú)法取得進(jìn)展，而老師及同學(xué)給的鼓勵(lì)和幫助，給予了我繼續(xù)下去的信念，排查可能出現(xiàn)染菌風(fēng)險(xiǎn)的因素，最終解決了這一難題。不輕言放棄，扎實(shí)的走好的每一步，才能獲得最終的勝利。求學(xué)的過(guò)程有太多故事和太多需要感謝的人，而這些我都會(huì)牢記在心。
2.感想與感悟
穩(wěn)定的心態(tài)。完成一個(gè)學(xué)術(shù)研究項(xiàng)目乃至完成一篇博士論文需要漫長(zhǎng)的反復(fù)打磨的過(guò)程，而這其中遇到的困難數(shù)不勝數(shù)，而這就需要我們?nèi)ヌ魬?zhàn)并克服這些困難，因此可能會(huì)有很強(qiáng)的挫敗感，可以與同學(xué)老師積極的溝通與交流，可能發(fā)現(xiàn)不僅能收獲科研上的幫助，心態(tài)也會(huì)變得更積極。總之，選擇了這條路，注定要披荊斬棘的走下去。
嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度。我們實(shí)驗(yàn)室的論文從撰寫(xiě)到呈現(xiàn)在盲審及答辯專家的面前時(shí)經(jīng)歷了無(wú)數(shù)次的修改，可以說(shuō)我們實(shí)驗(yàn)室每一篇畢業(yè)論文都凝聚了整個(gè)實(shí)驗(yàn)室的力量，對(duì)畢業(yè)論文要求嚴(yán)格，體現(xiàn)著老師對(duì)學(xué)生的責(zé)任心和對(duì)科研成果嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度。而我們?cè)谧珜?xiě)論文的時(shí)候也更應(yīng)該認(rèn)真仔細(xì)，句句斟酌，做到有理有據(jù)。這種態(tài)度對(duì)于我今后工作影響也十分深遠(yuǎn)，面對(duì)任務(wù)與挑戰(zhàn)時(shí)要始終嚴(yán)謹(jǐn)?shù)厝?duì)待。
雖然畢業(yè)論文早已停留在了第四章，但我的人生仍在繼續(xù)。希望我能不負(fù)母校和老師對(duì)自己的培養(yǎng)，繼續(xù)在藥物研發(fā)這條路上走下去，并收獲沿途美好的風(fēng)景與回憶。
03 博士論文簡(jiǎn)介
膠質(zhì)瘤是最為常見(jiàn)的原發(fā)性腦部腫瘤之一，其發(fā)病率占腦部惡性腫瘤的81%以上。雖然在所有癌癥中膠質(zhì)瘤的發(fā)病率較低，但是膠質(zhì)瘤死亡率較高。隨著研究的不斷深入，人們發(fā)現(xiàn)在腫瘤組織中存在著分化程度不同的腫瘤細(xì)胞，其中部分細(xì)胞具有干細(xì)胞特性，這部分細(xì)胞在腫瘤的侵襲、耐藥及復(fù)發(fā)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。但是，目前尚未有直接干預(yù)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的藥物在臨床上應(yīng)用。因此，尋找維持膠質(zhì)瘤干細(xì)胞特性的特異蛋白分子和信號(hào)通路，對(duì)于開(kāi)發(fā)抗膠質(zhì)瘤的新療法至關(guān)重要。
腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子4（TNF Receptor Associated Factor 4，TRAF4）是一種介導(dǎo)PI3K/AKT，TGF-β/SMAD等信號(hào)通路傳導(dǎo)的接頭蛋白。研究發(fā)現(xiàn)，TRAF4在多種腫瘤中異常高表達(dá)。然而，TRAF4在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)情況，以及TRAF4在調(diào)節(jié)膠質(zhì)瘤惡性進(jìn)展中的作用機(jī)制還不清楚。因此，在本論文中，分析TRAF4在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)情況，研究TRAF4與膠質(zhì)瘤臨床特征的相關(guān)性，闡明TRAF4維持膠質(zhì)瘤細(xì)胞干細(xì)胞特性的作用及機(jī)制，同時(shí)，發(fā)現(xiàn)了一種小分子藥物利培酮可以抑制TRAF4功能，從而抑制膠質(zhì)瘤的干細(xì)胞特性、增強(qiáng)化療敏感性，為膠質(zhì)瘤的臨床治療提供新的思路。
學(xué)術(shù)成果
1. 發(fā)現(xiàn)TRAF4在膠質(zhì)瘤干細(xì)胞特性的維持及對(duì)替莫唑胺耐藥過(guò)程中的重要作用及機(jī)制。
在本文中，闡述了TRAF4在膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中呈現(xiàn)高表達(dá)的狀態(tài)，并且TRAF4可以維持膠質(zhì)瘤的干細(xì)胞特性，增強(qiáng)對(duì)替莫唑胺的耐藥性，說(shuō)明TRAF4可能是一個(gè)較有潛力的抗膠質(zhì)瘤靶點(diǎn)。同時(shí)，揭示了TRAF4維持膠質(zhì)瘤干細(xì)胞特性的分子機(jī)制，并找到與TRAF4發(fā)生相互作用的下游分子小窩蛋白1（Caveolin-1，CAV1），發(fā)現(xiàn)TRAF4是通過(guò)CAV1來(lái)維持膠質(zhì)瘤干細(xì)胞特性以及調(diào)節(jié)膠質(zhì)瘤細(xì)胞對(duì)替莫唑胺的敏感性。
圖1 TRAF4通過(guò)CAV1調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞干細(xì)胞特性
2. 闡明TRAF4調(diào)控CAV1蛋白水平的機(jī)制。
在本文的研究中發(fā)現(xiàn)，TRAF4穩(wěn)定CAV1蛋白的作用是通過(guò)以下兩方面實(shí)現(xiàn)的：一是TRAF4通過(guò)抑制ZNRF1泛素化CAV1；二是TRAF4促進(jìn)USP7去泛素化CAV1。TRAF4破壞了膠質(zhì)瘤細(xì)胞中CAV1的泛素化與去泛素化的動(dòng)態(tài)平衡，使得CAV1的泛素化水平降低，最終穩(wěn)定CAV1的蛋白表達(dá)。
圖2 TRAF4降低CAV1的泛素化水平
3. 初步篩選了TRAF4的抑制劑并研究其在膠質(zhì)瘤中的作用。
在本文中，篩選出了一種與TRAF4發(fā)生結(jié)合的神經(jīng)系統(tǒng)藥物利培酮，并且研究了利培酮對(duì)于TRAF4和CAV1相互作用的影響。利培酮調(diào)節(jié)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞特性及其對(duì)替莫唑胺敏感性，為T(mén)RAF4抑制劑的開(kāi)發(fā)以及膠質(zhì)瘤復(fù)發(fā)和耐藥等臨床問(wèn)題提出了新的理論基礎(chǔ)。
圖3 利培酮通過(guò)抑制TRAF4的功能發(fā)揮抗膠質(zhì)瘤的作用